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人多能干細胞 (hPSC) 衍生的內胚層定量聚合酶鏈反應 (qPCR) 芯片設計用于表征 hPSC 衍生的確定性內胚層祖細胞及其分化的后代,包括胰腺、肝臟和腸道細胞。該 qPCR 陣列提供了體外分化后 hPSC 衍生的內胚層細胞的基因表達譜,并有助于開發定向分化至內胚層譜系的方案。根據它們在hPSCs中或在hPSC衍生的外胚層、中胚層和內胚層譜系細胞(D'Amour等人)中的表達來選擇基因,包括胰腺(Kroon等人)、肝臟(Hay等人)和腸道祖細胞(Grapin-Botton和Melton)。
qPCR 用于確定多個樣品中基因表達的穩態 mRNA 水平的變化,通常歸一化為內部對照基因的相對表達。基因特異性引物可擴增從 mRNA 逆轉錄的 cDNA 庫中的靶序列,并且與 TaqMan® 技術一樣,雜交序列特異性探針提供來自 Taq DNA 聚合酶的 5' 核酸外切酶活性的熒光信號。熒光信號的積累速率用于定量樣品 cDNA,從而定量原始細胞裂解物中 mRNA 的量。
該 qPCR 芯片包含經驗證的引物和探針,用于檢測 90 個基因,這些基因的表達與 hPSC 或 hPSC 衍生的外胚層、間胚層和內胚層細胞或胰腺、肝臟和腸道祖細胞相關,以及 6 個內源性(管家)對照基因。TBP(TATA 盒結合蛋白)qPCR 對照模板作為合成 DNA 陽性對照提供。其他基因信息和 qPCR 分析工具可在獲得。